一種含有枯草芽孢桿菌的多功能生物制劑

1.一種含有枯草芽孢桿菌的多功能生物制劑，其特征在于所述生物制劑的組分包括枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、黃腐酸、硫酸鋅；
各組分重量份數(shù)為：
枯草芽孢桿菌發(fā)酵液 30-65份
黃腐酸 2-30份
硫酸鋅 0.5-5份；
其中，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2，該菌株已經(jīng)在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，編號(hào)為CGMCC
9 10
NO.3222；菌液中菌含量為1×10-3×10 /ml。
2.如權(quán)利要求1所述的生物制劑，其特征在于所說的生物制劑的組分還包括維生素C、α奈乙酸、綠原酸、氨基水楊酸及糊精；
各組分重量份數(shù)為：
其中，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2；菌液中
9 10
菌含量為1×10-3×10 /ml。
3.如權(quán)利要求2所述的生物制劑，其特征在于所說的生物制劑各組分重量份數(shù)為：
其中，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2；菌液中
9 10
菌含量為1×10-3×10 /ml。
4.如權(quán)利要求2所述的生物制劑，其特征在于所說的生物制劑各組分重量份數(shù)為：
其中，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2；菌液中
9 10
菌含量為1×10-3×10 /ml。
5.如權(quán)利要求1或2所述的生物制劑，其特征在于所說的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制備方法如下：
將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2菌種經(jīng)LB平板活化，接到液體LB培養(yǎng)基在搖床上培養(yǎng)；然后接種進(jìn)行種子罐、二級(jí)種子罐、發(fā)酵罐中攪拌通氣培養(yǎng)；再進(jìn)入乳化罐中乳化、包埋，再進(jìn)入雙效濃縮器濃縮制得枯草芽孢桿菌發(fā)酵液。
6.如權(quán)利要求1或2所述的生物制劑，其特征在于所說的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的具體制備方法如下：
枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)：
將枯草芽孢桿菌菌種經(jīng)LB平板活化，接到液體LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L中，在28℃、轉(zhuǎn)速120rpm下，搖床上培養(yǎng)24h；
枯草芽孢桿菌的發(fā)酵方法：
發(fā)酵培養(yǎng)基為：蔗糖20g/L、硫酸銨5g/L、麩皮50g/L、檸檬酸三鈉2.5g/L、K2HPO4·3H2O
0.3g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.05g/L；
發(fā)酵培養(yǎng)的條件如下：發(fā)酵溫度30℃，初始pH值7.2，接種量5％；
發(fā)酵方法如下：按接種量送入種子罐中攪拌通氣培養(yǎng)24h，再進(jìn)入二級(jí)種子罐中攪拌通氣培養(yǎng)24h，然后注入發(fā)酵罐中攪拌同期培養(yǎng)48h；發(fā)酵液進(jìn)入乳化罐中乳化、包埋，再進(jìn)入雙效濃縮器，在45℃的溫度下濃縮制得枯草芽孢桿菌發(fā)酵液。
7.如權(quán)利要求2、3或4所述的生物制劑的制備方法，其特征在于具體制備步驟如下：
①制取枯草芽孢桿菌發(fā)酵液，作為微生物成分A備用；
②將黃腐酸，硫酸鋅加入50-60℃的水中充分?jǐn)嚢枞芙?，螯合，逐步降溫?0±2℃；作為土壤改良成分B備用；
③氨基水楊酸和/或綠原酸和/或α奈乙酸和/或維生素C加入50-60℃的水中充分?jǐn)嚢枞芙?，逐步降溫?0±2℃，作為植物誘導(dǎo)因子C備用；
④最后將上述備用的微生物成分A，土壤改良成分B，植物誘導(dǎo)因子成分C在配料罐中合并、混勻、添加糊精成分，進(jìn)行乳化加工，經(jīng)檢測合格，即為生物制劑成品。

一種含有枯草芽孢桿菌的多功能生物制劑 \n技術(shù)領(lǐng)域\n[0001] 本發(fā)明為含有枯草芽孢桿菌的多功能生物制劑，涉及土壤改良和抗重茬劑的配方和制備方法。 \n背景技術(shù)\n[0002] 良好的土壤條件是作物豐產(chǎn)的必要條件，但是由于氣候干旱，化肥過度使用，不合理的栽培和管理，連作等原因引起土壤生態(tài)惡化，作物減產(chǎn)，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。土壤生態(tài)的惡化對(duì)作物的影響主要是土壤板結(jié)引起的根系水、汽、肥失衡和重茬病原菌引起的重茬病害。探索有效地方法打破土壤板結(jié)，控制重茬病害具有巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)意義。 [0003] 目前，打破土壤板結(jié)的方法主要是機(jī)械深耕和施用土壤改良劑。機(jī)械深耕是利用大馬力農(nóng)業(yè)機(jī)械，翻耕土壤厚度達(dá)到60cm以上，疏松硬化的土壤，重構(gòu)團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，提高土壤肥力，保水保墑，這種方法無污染，不破壞有益菌群。缺點(diǎn)是土壤翻動(dòng)量大，容易形成高低壟，影響土壤平整度，并且勞動(dòng)強(qiáng)度大，成本高。施用土壤改良劑能夠有效改良土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，起到通風(fēng)通氣、保水保墑的作用。土壤改良劑包括人工合成改良劑和天然改良劑。聚丙烯酰胺，瀝青乳劑等人工合成改良劑成本高，持續(xù)時(shí)間短，對(duì)生態(tài)環(huán)境有不利影響。天然改良劑如多聚糖、腐殖酸、泥炭具有同樣的改良效果，但成本相對(duì)要低，綠色化環(huán)保，具有明顯的優(yōu)勢。 \n[0004] 抗重茬病害主要方法有：高溫處理，化學(xué)藥劑處理，微生物菌劑處理。高溫處理是通過覆蓋地膜等方式提高土壤溫度(40-50℃，15天)達(dá)到殺滅病原菌的效果。此法只能對(duì)地表進(jìn)行淺層滅菌，對(duì)深層土壤沒有顯著效果?；瘜W(xué)藥劑處理的方法，以氯化苦和溴甲烷使用較多，優(yōu)點(diǎn)是對(duì)土壤病原菌的毒性強(qiáng)，效果顯著。缺點(diǎn)是對(duì)環(huán)境造成不利影響，在殺滅病原菌的同時(shí)，將土壤中的有益菌群破壞，對(duì)作物生長不利，對(duì)人畜有毒害作用。微生物殺菌劑通過外施生防菌，固氮、解磷、解鉀等有益菌種，利用微生物間的競爭，拮抗，重寄生等作用，抑制或殺滅病原菌，保護(hù)并促進(jìn)植物根系生長，提高土壤肥力。是一種高效環(huán)保的抗重茬病害的方法。 \n[0005] 土壤的板結(jié)與重茬病害往往是相伴而生的，但是目前還沒有一種有效的方法，同時(shí)具備土壤改良和重茬病害防治的效果。 \n發(fā)明內(nèi)容\n[0006] 本發(fā)明目的在于提供一種結(jié)合了天然土壤改良劑的土壤改良效果和微生物土壤殺菌劑防治重茬病害效果的多功能生物制劑。其效果在于(1)利用生防微生物阻斷有害菌群侵染植物并殺滅病原菌，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性，防死苗爛棵；(2)利用微生物與黃腐酸成分的復(fù)合增效作用，誘導(dǎo)根系生長，實(shí)現(xiàn)生根壯苗，增強(qiáng)抗病能力；(3)利用微生物與黃腐酸、硫酸鋅的復(fù)合增效作用，打破土壤板結(jié)，形成團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)免深耕作，保水保墑、緩解肥害、提高地力。 \n[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2菌株。 \n[0008] 所述枯草芽孢桿菌DLD2菌株是從山東壽光菜園土壤中分離，使用牛肉膏、蛋白胨培養(yǎng)基，利用涂布平板法培養(yǎng)篩選得到的，命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2，該菌種已于2009年8月12日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，編號(hào)為CGMCC NO.3222，地址為北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研究所。 \n[0009] 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2有以下特征： \n[0010] 單個(gè)細(xì)胞0.7～0.8×2～3微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。革蘭氏陽性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長時(shí)，常形成皺醭。\n最適生長溫度為28℃。 \n[0011] 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制備方法如下： \n[0012] 將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)DLD2菌種經(jīng)LB平板活化，接到液體LB培養(yǎng)基中，進(jìn)行搖床培養(yǎng)；再接種進(jìn)入種子罐、二級(jí)種子罐、發(fā)酵罐中攪拌通氣發(fā)酵培養(yǎng)；然后進(jìn)入乳化罐中乳化、包埋，再進(jìn)入雙效濃縮器濃縮制得枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物，即為枯草芽\n9 10\n孢桿菌發(fā)酵液。菌液中菌含量達(dá)到1×10-3×10 /ml。 \n[0013] 具體制備方法為： \n[0014] 枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)： \n[0015] 將枯草芽孢桿菌菌種經(jīng)LB平板活化，再接到液體LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L)中，在28℃、轉(zhuǎn)速120rpm下，搖床培養(yǎng)24h。 [0016] 枯草芽孢桿菌的發(fā)酵方法： \n[0017] 發(fā)酵培養(yǎng)基為：蔗糖20g/L、硫酸銨5g/L、麩皮50g/L、檸檬酸三鈉2.5g/L、K2HPO4·3H2O0.3g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.05g/L。 \n[0018] 發(fā)酵培養(yǎng)的條件如下：發(fā)酵溫度30℃，初始pH值7.2，接種量3％-7％，最適接種量5％。 \n[0019] 發(fā)酵方法如下：按接種量送入種子罐中攪拌通氣培養(yǎng)24h，再進(jìn)入二級(jí)種子罐中攪拌通氣培養(yǎng)24h，然后注入發(fā)酵罐中攪拌通氣發(fā)酵培養(yǎng)48h；發(fā)酵結(jié)束后，進(jìn)入乳化罐中乳化、包埋，再進(jìn)入雙效濃縮器，在45℃的溫度下濃縮制枯草芽孢桿菌，制得枯草芽孢桿菌\n9 10\n發(fā)酵液。菌液中菌含量達(dá)到1×10-3×10 /ml。 \n[0020] 應(yīng)用上述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液與土壤改良劑黃腐酸，硫酸鋅等成分進(jìn)行復(fù)配，可制得用于土壤改良、抗重茬的多功能生物制劑。 \n[0021] 本發(fā)明所述土壤改良、抗重茬多功能生物制劑的組分包括枯草芽孢桿菌發(fā)酵液、黃腐酸、硫酸鋅，各組分重量份數(shù)為： \n[0022] \n[0023] 為了提高應(yīng)用效果和改善制劑性，本發(fā)明所述土壤改良、抗重茬多功能生物制劑中還可添加如下輔助組分：維生素C和/或α奈乙酸和/或綠原酸和/或氨基水楊酸及糊精等。 \n[0024] 具體制劑中的原料組分及其重量份數(shù)如下： \n[0025] \n[0026] 其中： \n[0027] 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液濃度中菌含量達(dá)到30億/ml。其他組分含量按100％計(jì)。 [0028] 本發(fā)明所述土壤改良、抗重茬多功能生物制劑的制備方法為： \n[0029] ①制取枯草芽孢桿菌發(fā)酵液：首先將枯草芽孢桿菌試管中的菌種經(jīng)LB平板活化，接到液體LB培養(yǎng)基中，滅菌后在搖床上培養(yǎng)，制得種子液；再放進(jìn)種子罐中培養(yǎng)，不斷攪拌，再進(jìn)入二級(jí)種子罐攪拌通風(fēng)培養(yǎng)，然后注入發(fā)酵罐中發(fā)酵；攪拌混勻，進(jìn)入乳化罐中乳化，再進(jìn)入雙效濃縮器，在45℃的溫度下濃縮制得枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；作為微生物成分A備用。(加 工中應(yīng)無菌操作)。 \n[0030] ②將黃腐酸，硫酸鋅加入50-60℃的水中充分?jǐn)嚢枞芙猓?，逐步降溫至\n30±2℃；作為土壤改良成分B備用。 \n[0031] ③氨基水楊酸和/或綠原酸和/或α奈乙酸和/或維生素C加入50-60℃的水中，充分?jǐn)嚢枞芙猓鸩浇禍刂?0±2℃，作為植物誘導(dǎo)因子C備用。 \n[0032] ④最后將上述備用的微生物成分A，土壤改良成分B，植物誘導(dǎo)因子成分C在配料罐中合并、混勻、添加糊精成分并進(jìn)行乳化加工，經(jīng)檢測合格，即為本發(fā)明的制劑成品。(上述制劑加工技術(shù)，除具體說明外，均參照現(xiàn)有技術(shù))。 \n[0033] 有益效果： \n[0034] 本發(fā)明所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，是一種自然環(huán)境中廣泛存在的對(duì)人畜無害的生防微生物?？莶菅挎邨U菌能夠通過生態(tài)位的競爭作用降低細(xì)菌性病原菌的侵染，通過溶菌作用降低真菌性病原菌侵染。此外，還能分泌抗菌物質(zhì)和細(xì)胞壁溶解酶類殺滅病原菌。枯草芽孢桿菌是一類植物促生根圈細(xì)菌(Plant growth-promoting rhizobaceria)，能夠促進(jìn)作物生長。 \n[0035] 本發(fā)明所述的黃腐酸，屬于腐植酸類，能夠促進(jìn)土壤團(tuán)粒形成，使土壤疏松，具有良好的吸附性。從而保肥、穩(wěn)肥、保水、透氣，克服土壤的板結(jié)現(xiàn)象，為提高土壤肥力打下基礎(chǔ)。腐植酸還能夠通過促進(jìn)作物呼吸作用，促進(jìn)根系生長發(fā)育實(shí)現(xiàn)壯苗。腐植酸是一種高效環(huán)保的天然土壤改良劑，并且制造工藝簡單，價(jià)格低廉。 \n[0036] 本發(fā)明所述的硫酸鋅是一種補(bǔ)充微量元素。由于作物的重茬種植，不斷吸收土壤中的特定的微量元素且得不到補(bǔ)充，尤其是鋅元素最易在重茬連作土壤中缺乏，補(bǔ)充硫酸鋅有助于緩解重茬引起的減產(chǎn)。 \n[0037] 氨基水楊酸，綠原酸，α奈乙酸，維生素C作為植物誘導(dǎo)因子C，有利于促進(jìn)作物生長、誘導(dǎo)植物體內(nèi)增加抗病活力，提高抗病能力。 \n[0038] 上述各組分的合理復(fù)配，能夠產(chǎn)生協(xié)同增效作用。 \n[0039] 本發(fā)明具體使用方法可以灌根、隨水澆灌、噴施、蘸根。 \n[0040] 本發(fā)明生物制劑具有土壤改良和抗重茬病害雙重效果，較全面解決了土壤生態(tài)惡化引起土壤板結(jié)和重茬病害。 \n具體實(shí)施方式：\n[0041] 制劑配方實(shí)施例： \n[0042] 例1、本發(fā)明土壤改良、抗重茬多功能生物制劑由以下按重量(份)比的原料配制而成： \n[0043] 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液42、黃腐酸15、硫酸鋅4、維生素C 7、α奈乙酸0.8、綠原酸\n10、氨基水楊酸7、糊精8、加水至100份。 \n[0044] 例2、本發(fā)明土壤改良、抗重茬多功能生物制劑由以下按重量(份)比的原料配制而成： \n[0045] 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液40、黃腐酸10、硫酸鋅3、維生素C 6、α奈乙酸0.7、綠原酸\n9、氨基水楊酸6、糊精7、加水至100份。 \n[0046] 例3、本發(fā)明土壤改良、抗重茬多功能生物制劑由以下按重量(份)比的原料配制而成： \n[0047] 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液45、黃腐酸20、硫酸鋅5、維生素C 7、α奈乙酸0.8、綠原酸\n9、氨基水楊酸6、糊精8、加水至100份。 \n[0048] 本發(fā)明土壤改良、抗重茬多功能生物制劑的制備方法： \n[0049] ①枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的制取方法：(加工中應(yīng)無菌操作) \n[0050] 將枯草芽孢桿菌菌種經(jīng)LB平板活化，接到液體LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 10g/L)中，在28℃、轉(zhuǎn)速120rpm下，搖床培養(yǎng)24h，按3％接種量進(jìn)行種子罐中攪拌通氣培養(yǎng)24h，在進(jìn)入二級(jí)種子罐中攪拌通氣培養(yǎng)24h，然后注入發(fā)酵罐中攪拌通氣培養(yǎng)48h，發(fā)酵結(jié)束后，進(jìn)入乳化罐中乳化、包埋，再進(jìn)入雙效濃縮器在45℃的溫度下濃縮，制得枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；作為微生物成分A備用。 \n[0051] ②將黃腐酸，硫酸鋅加入50-60℃的水中充分?jǐn)嚢枞芙?，螯合，逐步降溫至\n30±2℃；作為土壤改良成分B備用。 \n[0052] ③將氨基水楊酸，綠原酸，α奈乙酸，維生素C加入50-60℃的水中充分?jǐn)嚢枞芙猓鸩浇禍刂?0±2℃，作為植物誘導(dǎo)因子C備用。 \n[0053] ④最后將上述備用的微生物成分A，土壤改良成分B，植物誘導(dǎo)因子成分C在配料罐中合并、混勻、添加糊精成分并進(jìn)行乳化，再經(jīng)檢測合格即為本發(fā)明的成品； [0054] 具體應(yīng)用實(shí)例： \n[0055] 實(shí)例1： \n[0056] (1)土壤改良、抗重茬多功能生物制劑的配方參照配方實(shí)施例1。 [0057] (2)使用方法：于山東曲阜市董家鄉(xiāng)草莓大棚進(jìn)行。使用本發(fā)明稀釋60倍噴施地面，結(jié)合整地翻入地下。在草莓定植后使用本發(fā)明稀釋300-400倍噴施地面，連用3-4次，\n2\n噴施間隔10-15天。每666.7m 用量每次2-3升。草莓品種為美王1號(hào)。 \n[0058] 在相鄰地塊以不施用本發(fā)明作為對(duì)照。每小區(qū)面積為100m2，三次重復(fù)。其他管理全部同常規(guī)。 \n[0059] 對(duì)幼苗期的根、莖、葉的生長狀況進(jìn)行了調(diào)查。 \n[0060] 試驗(yàn)結(jié)果見表1： \n[0061] 表1本發(fā)明對(duì)草莓幼苗期根、莖、葉的影響 \n[0062] \n[0063] 由表1可知，施用本發(fā)明后，平均單株根系數(shù)、根長度、毛細(xì)根數(shù)量分別增加了\n44.4％、18.2％和64.9％，平均莖粗度增加了1倍，葉片數(shù)量、生長速度，有效葉齡，分別提高了72.2％、28.6％和40％。說明使用本發(fā)明可以改善土壤環(huán)境，促進(jìn)草莓生根壯苗，效果非常顯著。 \n[0064] 實(shí)例2 \n[0065] (1)土壤改良、抗重茬多功能生物制劑的配方參照配方實(shí)施例1。 [0066] (2)使用方法：于山東金鄉(xiāng)縣進(jìn)行，這一地區(qū)棉花重茬種植在5年以上，化肥不合理使用引起的土壤板結(jié)嚴(yán)重，土傳病害盛行。試驗(yàn)作物為棉花。使用本發(fā)明稀釋60倍噴施\n2\n地面和有機(jī)肥拌施，結(jié)合整地翻入地下。每666.7m 用量2-3升。 \n[0067] 在相鄰地塊以不施用本發(fā)明作為對(duì)照。每小區(qū)面積為100m2，三次重復(fù)。其他管理全部同常規(guī)。 \n[0068] 進(jìn)行苗期病害防治效果調(diào)查，分別為定植后10天、20天、30天、40天、45天，對(duì)這一階段由因土傳病、倒春寒、氣溫、地溫、高濕引起的猝倒病、立枯病、根腐病、紅腐病等苗期病害，進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)。 \n[0069] 試驗(yàn)結(jié)果見表2： \n[0070] 表2本發(fā)明對(duì)棉花苗期抗病能力的影響 \n[0071] \n[0072] 由表2可知，施用了本發(fā)明后，病死苗，染病苗在整個(gè)苗期(10天-45天)得到了有效地控制，維持了較高的健康苗率，表明該發(fā)明能夠在棉花易感病的苗期，改善土壤環(huán)境，有效控制土傳病害的發(fā)生。對(duì)于多年連作引起的重茬病害具有顯著的預(yù)防效果。 [0073] 實(shí)例3 \n[0074] (1)土壤改良、抗重茬多功能生物制劑的配方參照配方實(shí)施例1。 [0075] (2)使用方法：于山東大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究所試驗(yàn)田進(jìn)行土壤改良測試。以試驗(yàn)田土作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。使用本發(fā)明稀釋60倍噴施土壤，以噴施蒸餾水為對(duì)照組。\n取樣、測定方法參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)土壤環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(GB15618-1995)。分別測定對(duì)照組和施用本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)組的土壤有機(jī)質(zhì)含量、持水量、容重。 \n[0076] 表3本發(fā)明對(duì)土壤有機(jī)質(zhì)、含水量、容重的影響 \n[0077] \n[0078] 由表3可知，施用本發(fā)明后，土壤有機(jī)質(zhì)、持水量、土壤容重都有顯著提高。結(jié)果表明本發(fā)明能夠有效改善土壤顆粒度，打破土壤板結(jié)，提高土壤肥力和持水量。具有明顯的土壤改良效果。 \n[0079] 實(shí)例4 \n[0080] (1)土壤改良、抗重茬多功能生物制劑的配方參照配方實(shí)施例1。 [0081] (2)使用方法：于山東大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究所試驗(yàn)田進(jìn)行土壤參數(shù)檢測。土壤采用試驗(yàn)田土。使用本發(fā)明稀釋60倍噴施土壤，以盆栽黃瓜苗施用蒸餾水作為對(duì)照。共100盆，每盆3株。其他管理全部同常規(guī)。 \n[0082] 分別在施用后0d，3d，6d，9d，12d，24d對(duì)幼苗根系進(jìn)行取樣。方法參考李春喜主編《生物統(tǒng)計(jì)學(xué)》第四版(科學(xué)出版社)。每個(gè)取樣點(diǎn)重復(fù)三次。測定植物抗病相關(guān)酶活力，多酚氧化物酶(PPO)，超氧化物歧化酶(SOD)，過氧化物酶(POD)，β-1，3-葡聚糖酶含量(β-1，3-Gluconase)。方法參考張志良主編《植物生理學(xué)試驗(yàn)指導(dǎo)》第三版(高等教育出版社)。